本发明涉及农业生物技术领域，特别是涉及马桑香菇的菌种培养基及其制备方法及菌种培养和栽培原料的选择方法。
马桑香菇(Lentinus edodes Sing.),别名马桑菌；五里香。春秋季生于马桑【马桑(Coriaria sinica Maxinm)隶属马桑科，全株含马桑碱】的枯枝上。该菌是香菇属中发现的唯一生长在马桑树上的品种，目前其他香菇品种在长期的栽培过程中其香气遗传基因有所丢失(上海农业科学院陈明杰研究员)，致使这些香菇品种香气不浓。由于马桑香菇味美清香，具有很大的开发利用价值。但是，有关马桑香菇的菌种分离及培养技术和栽培原料却是现存技术中的空白，严重制约着该产业的发展。
本发明要解决的技术问题是克服现存技术中没有关于马桑香菇的菌种分离及培养技术的缺陷，提供一种马桑香菇菌种培养基及其制备方法及栽培马桑香菇的方法。
一种马桑香菇菌种培养基，包括以下质量份数的各组分：马桑木屑75～85份，麸皮15～25份，过磷酸钙0.5～1.2份和蔗糖0.5～1.2份，且马桑木屑无霉变，含水量≤12％，粉碎颗粒≤5mm，麸皮无霉变，含水量≤13％；过磷酸钙80％～95％溶于水，且P2O5的质量分数为14％～20％。蔗糖选用市售食用等级即可。
优选的，包括以下质量份数的各组分：马桑木屑80份，麸皮18份，过磷酸钙1份和蔗糖1份。
上述马桑香菇菌种培养基的制备方法为：向马桑木屑中加入沸水使其全部淹没，浸泡24小时，过滤去水分，加入麸皮、过磷酸钙、蔗糖，均匀搅拌，调整含水量为50％～55％，装瓶或装袋即得马桑香菇菌种培养基。装瓶的方法为将马桑香菇菌种培养基装量至菌种瓶瓶肩，压紧瓶内表面的培养基，松紧程度为：将菌种瓶倒置，培养基不下落；然后用清水洗净瓶外，再用纱布伸进瓶内，洗净瓶口瓶肩，檫干瓶口水分，塞上棉塞，用牛皮纸包住瓶口，捆扎；然后将菌种瓶放入高压蒸汽灭菌锅中，在1.5kg/cm2压力下，保持1h；将灭菌好的所述菌种瓶移到超净工作台内，让其自然冷却，形成成品菌种瓶；装袋的方法为将培养基装入菌袋中，装量至菌袋的4/5，压紧菌袋内表面的培养基，松紧程度为：菌袋培养基外表无空隙；然后，用清水洗净菌袋外表，再用纱布伸进袋内檫净菌袋上部袋口，套上菌环，用菌环盖住菌环口；然后菌袋放入高压蒸汽灭菌锅中，在1.5kg/cm2压力下，保持1h；将灭菌好的所述菌袋移到超净工作台内，让其自然冷却，形成成品菌袋。
1)、取当天采集的新鲜未开伞或刚开伞的马桑香菇子实体，剪去菌柄基部，用无菌脱脂棉檫去菌盖上的杂物，装入经过灭菌的塑料袋，放到塑料盒中并及时带回实验室；
2)用75％酒精棉擦拭上述塑料袋外壁，移到超净工作台，无菌条件下，用解剖刀划开上述无菌塑料袋一小口，使菌盖顶部刚好露出，再用解剖刀削去菌盖表皮，露出菌盖内的白色组织，在盖上与菌柄结合部用解剖刀挑取白色组织3～5mm大小组织块接入菌种瓶培养基中部；
3)、将菌种瓶置于20℃～25℃恒温箱培养，每天观察接入的所述组织块的萌发状况：若所述组织块及周围无污染，单菌落，为正常，菌种分离成功；否则为污染，要及时检出；将正常萌发，形成单一菌落的所述菌种瓶，在培养基上形成一圈直径为2～4cm菌落时，及时转接，使之纯化，转接两次以上后形成马桑香菇菌种。
菌落特征：白色，菌丝绒毛状，匍匐生长，菌落边缘整齐，边缘与中央部位颜色一致，质地均匀。
菌丝体特征：肉眼观察菌丝体白色，显微镜下菌丝透明，分枝，有隔，初生菌丝体仟细，次生菌丝体粗壮。
进一步的，菌种转接的方法为在超净工作台无菌条件下，用接种针挑取菌落边缘菌丝体，转接到另一个菌种瓶培养基上，置于20℃～25℃恒温箱培养，每天观察接入菌体生长情况，菌丝吃料，生长整齐，浓密，健壮，无污染。
1)用75％酒精棉擦拭菌袋外壁，移到超净工作台，无菌条件下，取1.5～2cm大小的马桑香菇菌种块接入菌袋培养基中部，使其与培养基有较好接触；
2)、置于20℃～25℃恒温箱培养，每天观察接入的所述菌种块的萌发状况：若所述菌种块及周围无污染，单菌落，为正常，菌袋转接成功；
2)对上述菌袋正常萌发，形成单一菌落的所述菌袋，等长满菌袋后，让其转色岀菇。
1)、取直径4cm以上，砍伐15天以后得马桑树枝，切成0.8～1.2m，形成成品菌材；
2)、在菌材上打孔，接入培养好的马桑香菇菌种，使其与马桑菌材有较好接触；自然温度条件待菌丝长满菌材后，转色岀菇。
本发明中的超净工作台是指为了适应现代化工业、光电产业、生物制药以及科研试验等领域对局部工作区域洁净度的需求而设计的。超净工作台原理是在特定的空间内，室内空气经预过滤器chuck虑，由小型离心式风机压入静压箱，再经空气高效过滤器二级过滤，从空气高效过滤器出风面吹出的洁净气流具有一定的和均匀的断面风速，可以排除工作区原来的空气，将尘埃颗粒和生物颗粒带走，以形成无菌的高洁净的工作环境。超净工作台的优点是操作便捷自如，比较舒适，工作效率，预备时间短，开机10分钟以上就可以操作，基本上可随时使用。在工厂化生产中，接种工作量很大，需经常长久地工作时，超净工作台是很理想的设备。超净工作台由三相电机作鼓风动力，功率145-260W左右，将空气通过由特别的微孔泡沫塑料片层叠合组的“超级滤清器”后吹送出来，形成连续不断的无尘无菌的超净空气层流，即所谓“有效的特殊空气”，它除去了大于0.3μm的尘埃，真菌和细菌孢子等等。超净空气的流速为24-30m/min，这已足够防止附近空气可能袭扰而引起的污染，这样的流速也不会妨碍采用酒精灯或酒精灯对器械等的灼烧消毒。工作人员就在这样的无菌条件下操作，保持无菌材料在转移接种过程中不受污染。但是万一操作中途遇到停电，暴露在未过滤空气中的材料便难以幸免污染。这时应迅速结束工作，并在瓶上作出记号，内中的材料如处增殖阶段，则以后不再用作增殖而转入生根培养。如为一般性生产材料，极其丰富也可以弃去。如处生根过，则可留待以后种植用。
1、本发明采用组织分离法，不经过试管培养，直接分离接入制备好的马桑木屑，麸皮，过磷酸钙+蔗糖的培养基培养，通过转接纯化，成功获得马桑香菇纯培养菌种；
2、本发明具有分离及培养基制作方便，不经试管分离培养，缩短了菌种培养周期。
以下对本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。
一种马桑香菇菌种培养基，包括以下质量份数的各组分：马桑木屑75份，麸皮15份，过磷酸钙0.5份和蔗糖0.5份，且马桑木屑无霉变，含水量≤12％，粉碎颗粒≤5mm，麸皮无霉变，含水量≤13％；过磷酸钙80％～95％溶于水，且P2O5的质量分数为14％～20％。蔗糖选用市售食用等级即可；培养基的含水量为50～55％。
制备方法为：向马桑木屑中加入沸水使其全部淹没，浸泡24小时，过滤去水分，加入麸皮、过磷酸钙、蔗糖，均匀搅拌，调整含水量为50％～55％，装瓶或装袋即得马桑香菇菌种培养基。装瓶的方法为将马桑香菇菌种培养基装量至菌种瓶瓶肩，压紧瓶内表面的培养基，松紧程度为：将菌种瓶倒置，培养基不下落；然后用清水洗净瓶外，再用纱布伸进瓶内，洗净瓶口瓶肩，檫干瓶口水分，塞上棉塞，用牛皮纸包住瓶口，捆扎；然后将菌种瓶放入高压蒸汽灭菌锅中，在1.5kg/cm2压力下，保持1h；将灭菌好的所述菌种瓶移到超净工作台内，让其自然冷却，形成成品菌种瓶；装袋的方法为将培养基装入菌袋中，装量至菌袋的4/5，压紧菌袋内表面的培养基，松紧程度为：菌袋培养基外表无空隙；然后，用清水洗净菌袋外表，再用纱布伸进袋内檫净菌袋上部袋口，套上菌环，用菌环盖盖住菌环口；然后菌袋放入高压蒸汽灭菌锅中，在1.5kg/cm2压力下，保持1h；将灭菌好的所述菌袋移到超净工作台内，让其自然冷却，形成成品菌袋。
1)、在贵州省大方县采集当天的新鲜未开伞或刚开伞的马桑香菇子实体，剪去菌柄基部，用无菌脱脂棉檫去菌盖上的杂物，装入经过灭菌的塑料袋，放到塑料盒中并及时带回实验室；比如可以再一次进行选择贵州省大方县的马桑香菇子实体；
2)用75％酒精棉擦拭上述塑料袋外壁，移到超净工作台，无菌条件下，用解剖刀划开上述无菌塑料袋一小口，使菌盖顶部刚好露出，再用解剖刀削去菌盖表皮，露出菌盖内的白色组织，在盖上与菌柄结合部用解剖刀挑取白色组织3～5mm大小组织块接入菌种瓶培养基中部；
3)、将菌种瓶置于20℃～25℃恒温箱培养，每天观察接入的所述组织块的萌发状况：若所述组织块及周围无污染，单菌落，为正常，菌种分离成功；否则为污染，要及时检出；将正常萌发，形成单一菌落的所述菌种瓶，在培养基上形成一圈直径为2～4cm菌落时，及时转接，使之纯化，转接两次以上后形成马桑香菇菌种。
菌种转接的方法为在超净工作台无菌条件下，用接种针挑取菌落边缘菌丝体，转接到另一个菌种瓶培养基上，置于20℃～25℃恒温箱培养，每天观察接入菌体生长情况，菌丝吃料，生长整齐，浓密，健壮，无污染。
1)用75％酒精棉擦拭菌袋外壁，移到超净工作台，无菌条件下，取1.5～2cm大小的马桑香菇菌种块接入菌袋培养基中部，使其与培养基有较好接触；
2)、置于20℃～25℃恒温箱培养，每天观察接入的所述菌种块的萌发状况：若所述菌种块及周围无污染，单菌落，为正常，菌袋转接成功；
2)对上述菌袋正常萌发，形成单一菌落的所述菌袋，等长满菌袋后，让其转色岀菇。
一种马桑香菇菌种培养基，包括以下质量份数的各组分：马桑木屑75～85份，麸皮15～25份，过磷酸钙0.5～1.2份和蔗糖0.5～1.2份，且马桑木屑无霉变，含水量≤12％，粉碎颗粒≤5mm，麸皮无霉变，含水量≤13％；过磷酸钙80％～95％溶于水，且P2O5的质量分数为14％～20％。蔗糖选用市售食用等级即可。
1)、取直径4cm以上，砍伐15天以后得马桑树枝，切成0.8～1.2m，形成成品菌材；
2)、在菌材上打孔，接入培养好的马桑香菇菌种，使其与马桑菌材有较好接触；自然温度条件待菌丝长满菌材后，转色岀菇。
一种马桑香菇菌种培养基，包括以下质量份数的各组分：马桑木屑80份，麸皮18份，过磷酸钙1份和蔗糖1份，且马桑木屑无霉变，含水量≤12％，粉碎颗粒≤5mm，麸皮无霉变，含水量≤13％；过磷酸钙80％～95％溶于水，且P2O5的质量分数为14％～20％。蔗糖选用市售食用等级即可。
本发明实施例1-3均能够得到马桑香菇菌种的实体。本发明采用组织分离法，不经过试管培养，直接分离接入制备好的马桑木屑，麸皮，过磷酸钙+蔗糖的培养基培养，通过转接纯化，成功获得马桑香菇纯培养菌种。本发明具有分离及培养基制作方便，不经试管分离培养，缩短了菌种培养周期——仅需60天，而现存技术中通常经过试管分离，纯化，培养，获得母种，再转接原种、栽培种，需要80-90天，本技术60-70天，可缩短菌种培养周期20天。现存技术中一般会用其他树种木屑或采用其他树种树木栽培马桑香菇，只能进行营养生长(即菌丝体生长)，不可以进行结实性生长(即子实体生长)，本技术采用马桑树木屑或马桑树椴木栽培马桑菌，可获得马桑香菇子实体。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案做修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
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